一、基本原理

 

　　朗伯-比尔定律是分光光度法的理论基础，其数学表达式为：A=εbc，其中：

 

　　-A为吸光度（无单位）

 

　　-ε为摩尔吸光系数（L·mol⁻¹·cm⁻¹）

 

　　-b为光程长度（cm，通常为比色皿的厚度）

 

　　-c为溶液浓度（mol/L）

 

　　当ε和b已知且保持不变时，吸光度A与溶液浓度c成正比关系。通过测量标准溶液的吸光度，建立标准曲线，即可测定未知浓度溶液的浓度。

 

　　二、实验步骤

 

　　1.仪器准备

 

　　(1)接通分光光度计电源，预热15-30分钟，使仪器稳定。

 

　　(2)根据待测物质的最大吸收波长（可通过全波长扫描确定），设置仪器的工作波长。

 

　　(3)将装有空白溶液（通常是溶剂）的比色皿放入样品室，调零（即将空白溶液的吸光度设为0）。
 

 

　　2.标准曲线制备

 

　　(1)配制一系列已知浓度的标准溶液（通常5-7个浓度点）。

 

　　(2)从低浓度到高浓度依次测量各标准溶液的吸光度。

 

　　(3)以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线（现代仪器通常可自动完成）。

 

　　3.样品测定

 

　　(1)将待测溶液装入干净的比色皿中，注意不要有气泡和指纹。

 

　　(2)放入样品室，测量吸光度值。

 

　　(3)根据标准曲线或仪器自动计算功能，得出样品浓度。

 

　　4.数据处理

 

　　(1)检查标准曲线的线性相关系数（R²），一般要求R²>0.99。

 

　　(2)若样品吸光度超出标准曲线范围，需适当稀释后重新测定。

 

　　三、注意事项

 

　　1.比色皿使用：

 

　　-手持比色皿时应接触磨砂面，避免接触透光面。

 

　　-不同比色皿间可能存在差异，测定时应固定使用同一比色皿或进行校正。

 

　　-使用后及时清洗，避免有色物质残留。

 

　　2.溶液要求：

 

　　-待测溶液应澄清透明，如有悬浮物需过滤或离心。

 

　　-溶液浓度应控制在吸光度0.2-0.8范围内（此范围内误差最小）。

 

　　-强酸、强碱或有机溶剂可能腐蚀比色皿，需谨慎使用。

 

　　3.仪器维护：

 

　　-定期校准波长和吸光度准确性。

 

　　-长时间不用时应关闭电源，覆盖防尘罩。

 

　　-避免震动和强光直射仪器。

 

　　四、常见问题及解决方法

 

　　1.吸光度不稳定：

 

　　-检查电源是否稳定

 

　　-确认比色皿外壁是否清洁干燥

 

　　-检查样品室门是否关闭

 

　　2.标准曲线线性差：

 

　　-检查标准溶液配制是否准确

 

　　-确认是否选择了正确的测定波长

 

　　-检查溶液是否发生化学反应或降解

 

　　3.测定结果偏差大：

 

　　-重新校准仪器

 

　　-检查空白溶液是否合适

 

　　-确认是否有干扰物质存在