一、波长设置方法

 

　　波长设置是分光光度分析的首要步骤。最佳吸收波长的确定通常通过全波长扫描来完成。将待测溶液放入比色皿中，在仪器的波长范围内进行连续扫描，记录各波长下的吸光度值，绘制吸收光谱曲线。曲线的最高点对应的波长即为最大吸收波长（λmax），该波长下测定可获得最高的灵敏度。

 

　　在实际操作中，还需要考虑共存物质的干扰。当样品中存在多种吸光物质时，需要选择干扰最小、待测物吸收最大的波长作为测定波长。有时为了避免干扰，也可选择次强吸收峰进行测定。对于多组分分析，可采用导数光谱法等技术手段来提高选择性。

 

　　仪器校准是确保波长准确性的重要环节。使用标准物质（如钬玻璃滤光片）定期校准仪器，可确保波长指示值与实际值一致。在校准过程中，应注意环境温度的影响，必要时进行温度补偿。

 

　　二、参比溶液选择原则

 

　　参比溶液的主要作用是消除溶剂、比色皿等因素对测定的影响。常用的参比溶液是溶剂空白，即使用与样品溶液相同的溶剂作为参比。这种方法适用于简单体系的分析，能够有效扣除溶剂背景。

 

　　当样品基质复杂时，需要采用更精确的参比溶液。试剂空白法是在溶剂中加入除待测物外的所有试剂，用于扣除试剂背景。样品空白法则使用经过特殊处理的样品溶液，如加入掩蔽剂或进行特殊反应，以消除样品基质的干扰。

 

　　参比溶液的选择必须考虑样品的特性。对于有色样品，可能需要使用褪色溶液作为参比；对于浑浊样品，则需要考虑光散射的影响。在某些特殊情况下，还可以使用双波长法或多波长法来消除背景干扰。

 

　　三、实验操作要点

 

　　样品处理是获得准确结果的前提。样品应充分溶解，必要时进行过滤或离心以去除悬浮物。对于易挥发或光敏性样品，需要采取适当的保护措施。样品浓度应控制在比尔定律的线性范围内，必要时进行稀释。

 

　　比色皿的使用直接影响测定结果。使用前应检查比色皿的清洁度，确保无划痕、无污染。装液时避免气泡产生，擦拭比色皿外壁时使用专用擦镜纸。对于挥发性样品，应及时加盖防止溶剂挥发。

 

　　数据处理时应注意扣除空白值，必要时进行基线校正。对于多组分分析，可采用化学计量学方法进行数据处理。建立标准曲线时，应确保线性相关系数符合要求。

 

　　分光光度分析是一项精密的定量分析技术，波长设置和参比溶液选择是其中的关键环节。通过科学的方法选择和严格的实验操作，可以获得准确可靠的分析结果。随着分析技术的发展，分光光度法在环境监测、食品安全、药物分析等领域的应用将更加广泛。实验人员应深入理解原理，掌握操作要点，不断提高分析水平。